• Unser Value Read Prozess wurde für Stich- oder Glycerinkulturen mit dem entsprechenden E. coli Klon, gereinigte Plasmid-DNA und gereinigte oder ungereinigte PCR-Produkte optimiert
• Bitte verwenden Sie auschließlich 1,5 ml Tubes (ohne Parafilm) oder 96-well Mikrotiterplatten für Ihre Proben und Primer. Bitte senden Sie uns pro Sequenzierreaktion ein Tube
  
• Bitte senden Sie die DNA flüssig. Entweder gelöst in bi-destilliertem Wasser oder in 5 mM Tris-HCl (pH 8,0 – 9,0) in einem Gesamtvolumen von 15 µl
  
• Platten können mit PCR-Produkten und Plasmiden gemischt werden, falls keine weitere Aufreinigung mehr durchgeführt werden muss
• Für optimale Ergebnisse sollte in der gesamten Platte die gleiche Konzentration / Menge an DNA vorhanden sein
• Primer können in einer separaten Platte entsprechend der gleichen Anordnung wie die Proben in der Probenplatte mitgeschickt werden
• Die Plattenposition H12 sollte für interne Qualitätskontrollstandards freigelassen werden.

Konzentrationsangaben:

• Gereinigte Plasmid-DNA:
  50-100 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl
• Gereinigte PCR-Produkte:
  < 300 bp:            2 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl
  300-1000bp:      5 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl
  > 1000 bp:        10 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl
  Für ungereinigte PCR-Produkte gilt die doppelte Menge
  
• Primerkonzentration:
  2 pmol/µl; Mindestvolumen: 15 µl (entspricht einer Menge von 30 pmol)

Voreingestelltes Proben-Primergemisch in Tubes oder Platten:

• Gereinigte Plasmid-DNA:
  50-100 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl inkl. 15pmol Primer
• Gereinigte PCR-Produkte:
  < 300 bp:            2 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl inkl. 15pmol Primer
  300-1000bp:      5 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl inkl. 15pmol Primer
  > 1000 bp:        10 ng/µl in einem Gesamtvolumen von 15 µl inkl. 15pmol Primer

• Bitte verwenden Sie 1,5 ml Tubes oder 96-well Mikrotiterplatten
• Verwenden Sie den ABI Big Dye Terminator Kit (v3.1)
• Das Big Dye Volumen pro Reaktion sollte nicht größer als 1 µl sein
• Das gesamte Reaktionsvolumen sollte 10 bis 20 µl betragen
• Die Lieferung der Proben sollte ausschließlich auf Trockeneis erfolgen.

• Sie können entweder eine Stich- oder Glycerinkultur mit dem entsprechenden E. coli Klon, die gereinigte Plasmid-DNA, ungereinigte oder gereinigte PCR-Produkte oder genomische DNA einsenden
• Bitte verwenden Sie 1,5 ml Tubes für Ihre Proben und Primer
• Wir bitten die DNA flüssig einzusenden. Entweder in bi-destilliertem Wasser oder in einer 5 mM Tris-HCl (pH 8,0-9,0) Lösung

Konzentrationsangaben:

• Gereinigte Plasmid DNA:
  50-100 ng/µl; Minimum 1 µg pro Reaktion
  Bitte senden Sie die doppelte Menge für Proben mit Hairpin- oder Sekundärstrukturen, hohem GC-Gehalt oder anderen schwierigen Regionen
• BAC-, PAC-, Cosmid-, Fosmid-DNA:
  200-1000 ng/µl; Minimum 4 µg pro Reaktion
• Gereinigte PCR-Produkte:
  < 300 bp:            2 ng/µl in einem Mindestvolumen von 15 µl
  300-1000bp:      5 ng/µl in einem Mindestvolumen von 15 µl
  > 1000 bp:        10 ng/µl in einem Mindestvolumen von 15 µl
  Die Menge sollte für ungereinigte Produkte verdoppelt werden
• Genomische DNA:
  5-50 ng/µl; die Mindestmenge beträgt 200 ng pro Reaktion
• Primerkonzentration:
  2 pmol/µl, das Mindestvolumen pro Reaktion beträgt 15 µl (entspricht einer Menge von 30 pmol)

• Sie können entweder eine Stich- oder Glycerinkultur mit dem entsprechenden E. coli Klon, gereinigte Plasmid-DNA oder ungereinigte oder gereinigte PCR-Produkte einsenden
• Bitte verwenden Sie 1,5 ml Tubes für Ihre Proben und Primer
• Senden Sie uns, falls vorhanden, eine Referenzsequenz in elektronischer Form
  
  

Mindestkonzentration:

Plasmid-DNA: 100 ng/µl
PCR-Produkte: 10 ng/µl


Minimale Gesamtmenge:

• Einzelstrangsequenzierung:
  Plasmid-DNA: 1 µg/1 kb Insert
  PCR-Produkt: 100 ng/1 kb PCR-Produkt
  
  
• Doppelstrangsequenzierung:
  Plasmid-DNA: 2 µg/1 kb Insert
  PCR-Produkt: 200 ng/1 kb PCR Produkt
  
  
• 4fach Coverage:
  Plasmid-DNA: 4 µg/1 kb Insert
  PCR-Produkt: 600 ng/1 kb PCR Produkt